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hs probe qpcr mix with udg (p2301-p2302-p2303-p2304-p2305)

促销: 490.00~29800.00

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p2301(1ml) p2302(1mlx5) p2303(1mlx10) p2304(1mlx50) p2305(1ml×100)

hs probe qpcr mix with udg

cat. #p2301p2302p2303p2304p2305

 

产品简介

hs probe qpcr mix with udg用于探针法实时定量pcr2×浓缩预混液,使用时只需加入模板引物和探针即可进行反应。本品含有类抗体技术修饰的热启动酶hotstart taq dna聚合酶配合东盛特制的real time pcr buffer,不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增,而且能够提高扩增效率,可以进行高灵敏度高特异性的pcr反应。该试剂引入了 dutp/udg 防污染系统,可以在pcr反应前清除含dutppcr产物有效避免因扩增产物的交叉污染对定量的影响。本品在宽广的定量域内具有良好的线性关系,对靶基因定量准确、可信度高,重复性好。本品可搭配taqman等各类荧光探针使用,与常见定量pcr仪完美兼容,如abirochebio-rad等。

产品组成

component

p2301

p2302

p2303

p2304

p2305

2× hs probe qpcr mix with udga

1 ml

1 ml×5

1 ml×10

1 ml×50

1 ml×100

超纯水

1 ml

1 ml×5

-

-

-

a 包含hotstart taq dna聚合酶,dntp/dutp mixudguracil-dna glycosylase,尿嘧啶dna糖基化酶)及反应缓冲液等。

保存条件

-20℃保存2年,4℃可短期保存。

质量控制

纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:经不同来源的模板和引物检测,产品具有优秀的特异性、灵敏性及可重复性等。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配制以下反应体系:

component

volume

final concentration

dna template[1]

1-4 μl

variable

forward primer (10 μm)[2]

0.4 μl

0.2 μm

reverse primer (10 μm)[2]

0.4 μl

0.2 μm

2× hs probe qpcr mix with udg

10 μl

1×

probe (10 μm)[3]

variable

0.1-0.5 μm

ddh2o

variable

-

total volume[4]

20 μl

-

[1] dna模板建议用量(20 μl体系):1-10 ng cdna,或10-100 ng gdna。加样体积不宜过小,以免造成较大的误差,但未稀释的cdna不宜超过总体积的1/10。因此模板建议浓度(加样前):cdna 1-10 ng/μlgdna 10-100 ng/μl

[2] 引物终浓度建议范围:0.1-1.0 μm, 通常引物终浓度为0.2 μm效果较好

[3] 使用探针的浓度与real time pcr扩增仪、探针种类和荧光标记物种类有关,使用时请参照相关说明。通常探针终浓度在0.1-0.5 μm之间。

[4] 建议总体积不小于10 μl,以免造成较大的加样误差。具体体积范围参考仪器说明。

注意:对于某些固定型号的仪器,需要添加rox才能精确测定ct值。由于rox的使用体积较小,建议将rox提前与qpcr mix混匀使用。rox用量参照具体仪器说明,下表仅供参考。

instruments

rox (100x)

abi prism 7000/ prism 7700/ 7300/ 7900ht/ step one/ step one plus/ geneamp 5700

1-2% (high rox)

abi 7500/ 7500 fast/ viia 7/ quantstudio 6/7/12k flex; agilent stratagene mx3000p/ mx3005p/ mx4000

0.2% (low rox)

bio-rad cfx96/ cfx384/ iq/ iq5; mj research opticon 2/ chromo 4; roche lightcycler 480/ 96; corbett rotor gene g/ q/ 3000/ 6000; thermo pikoreal 96; eppendorf mastercycler ep realplex; cepheid smart cycler

no rox

2. 设定反应程序进行qpcr反应

步法程序示例如下:

stage

temperature

time

cycle

udg pre-treatment

37

2 min

1

initial denaturation

95

3 min

1

denaturation

95

10 sec

40

annealing & extension[1]

60

30 sec

[1] 仪器在此阶段进行信号采集请根据仪器类型设置反应时间。如需优化温度,建议在55-65范围内调整。

若反应效果不佳,建议采用三步法扩增程序。

经典三步法程序示例如下:

stage

temperature

time

cycle

udg pre-treatment

37

2 min

1

initial denaturation

95

3 min

1

denaturation

95

10 sec

40

annealing[1]

60

15 sec

extension

72℃

20 sec

[1] 仪器在此阶段进行信号采集常用退火温度在55-65℃之间。退火温度一般设定为所用引物的tm-5℃,若低于55℃,则以tm值为退火温度,一般不低于55℃请根据仪器类型设置反应时间。 

3. 分析结果

观察扩增曲线;调整基线,计算ct值;进行相对或绝对定量。

注意事项

1 使用前mix需要完全解冻,充分混匀。尽量避免多次反复冻融。短期使用可保存于4℃

2 将(n x)份反应液混匀后再分注到n个单管中,可降低加样误差。(n为重复次数,x为损耗量,一般为n1/10

3 abi的定量仪器大部分需要rox校正管间差异,bio-rad的定量仪器不需要rox校正。具体仪器请参照其使用说明。

4 轻轻混匀反应液,避免产生气泡,气泡会干扰荧光检测。可瞬时离心去除气泡。

5 引物的特异性、用量以及退火温度是影响实验结果的重要因素。务必设计特异性好的引物,随实验结果适当调整引物用量(0.1 μm-1.0 μm——特异性较差时减少引物用量,或以3℃为增量提高退火温度,扩增效率较低时增加引物用量。

6 dna模板的量应小于500 ng/反应,过高的模板量会引起非特异性扩增。应根据模板类型与基因表达量适当调整用量。

7 各类探针应参照相应的指南进行设计,并根据所用扩增仪类型、探针种类和荧光标记物种类等调整用量

相关产品

名称

货号

规格

pcr mix

p2011/p2012/p2013/p2014/p2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

power green qpcr mix

p2101/p2102/p2103/p2104/p2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

m1181/m1182

50/250

dstm5000

m1111/m1112

60/300

高纯度质粒小提试剂盒

n1011/n1012/n1013

50/100/200

通用rna提取试剂盒

r1051

50

基因组dna快速提取试剂盒

n1111/n1112

50/100

dna凝胶回收试剂盒

n1071/n1072/n1073

50/100/200

rt-pcr kit

r1011/r1012

20/100

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