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pcr mix(p2011-p2012-p2013-p2014-p2015)

促销: 156.00~5850.00

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p2011(1 ml) p2012(5 ml) p2013(10ml) p2014(50ml) p2015(100ml)

pcr mix

cat. #p2011p2012p2013p2014p2015

产品简介

pcr mix浓缩的pcr扩增预混和溶液,含有taq dna聚合酶、dntps、缓冲液等pcr扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行pcr,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强pcr扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-da突出端,可直接用于ta克隆。

taq dna聚合酶是嗜热性细菌thermus aquaticus来源的热稳定重组型taq dna聚合酶,分子量为94 kd。扩增片段的长度可达10 kb(简单模板)。延伸速度为1min/kb70-75℃,简单模板可达10s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。

产品组成

component

p2011

p2012

p2013

p2014

p2015

2× pcr mix

1 ml

1 ml× 5

1 ml× 10

1 ml× 50

1 ml× 100

超纯水

1 ml

1 ml× 5

-

-

-

本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,pcr扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:pcr方法检测无宿主残余dna,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

ordinal

component

volume

(50 μl reaction volume)

final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

2× pcr mix

25   μl

2

upstream   primer (10 μm)[1]

2 μl

0.4   μm

3

downstream   primer (10 μm)[1]

2 μl

0.4   μm

4

template   dna[2]

1-4   μl

<1μg

5

超纯水[3]

to   50 μl

-

optional

mgcl2(mgso4)/pcr   enhancer[4]

variable

-

[1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μm。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。

[2] 不同模板最佳用量不同,部分dna模板建议用量如下表(50 μl反应体系)。

template

人类基因组dna

λdna

大肠杆菌基因组dna

质粒dna

dosage

0.1μg-1μg

0.5ng-5ng

10ng-100ng

0.1ng-10ng

[3] 可单独订购超纯水(cat. #p9021/p9022/p9023)。

[4] 可单独订购25mm mgcl2cat. #p9031)和pcr enhancercat. #p9041)。

2. 设定反应程序进行pcr反应

stage  

temperature

time

number   of cycles

initial   denaturation

94℃

3   min

1

denaturation

94℃

30   sec

25-35  

annealing

55-68℃[1]

30   sec

extension

72℃

variable[2]

final   extension

72℃

5-10   min

1

[1] 退火温度应根据tm值较低的引物来设。

[2] 延伸时间按1min/kb来设最佳(简单模板可达10s/kb)。

3. 分析结果

反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组dna中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板dna的纯度;4使用pcr添加剂,如pcr enhancercat. #p9041mgcl2cat. #p9031等可提高产量。

操作注意事项

1 室温下taq dna聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加模板dna

2 taq dna聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在pcr产物3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于ta克隆。

3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。taq dna聚合酶的碱基错误率为1×10-5

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的gc,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;gc含量控制在40-60%,且上下游引物gc含量尽量接近;tm值控制在55-65℃之间,且上下游引物tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与tm值计算。

相关产品

名称

货号

规格

pcr mix

p2011/p2012/p2013/p2014/p2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

power green qpcr mix

p2101/p2102/p2103/p2104/p2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

m1181/m1182

50/250

dstm5000

m1111/m1112

60/300

高纯度质粒小提试剂盒

n1011/n1012/n1013

50/100/200

通用rna提取试剂盒

r1051

50

基因组dna快速提取试剂盒

n1111/n1112

50/100

dna凝胶回收试剂盒

n1071/n1072/n1073

50/100/200

rt-pcr kit

r1011/r1012

20/100

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