k8凯发app的产品中心 > dna纯化相关产品 > 大片段dna凝胶回收试剂盒(n1074-n1075-n1076)

大片段dna凝胶回收试剂盒(n1074-n1075-n1076)

促销: 364.00~1118.00

分享

运费 ¥0.00
n1074(50次) n1075(100次) n1076(200次)

大片段dna凝胶回收试剂盒

产品组分

货号

n1074

50次)

n1075

100次)

n1076

200次)

溶液bd

45ml

90 ml

90 ml×2

溶液pe

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液eluent

2.5 ml

5 ml

10 ml

dna纯化柱

50

100

200

说明书

1

1

1


溶液pe初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

溶液bd中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

产品说明

本产品采用了经典的硅胶膜技术,用于从琼脂糖凝胶中回收大片段dna5-40 kb)。其纯化原理是含有目的片段的琼脂糖凝胶溶解后,硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的dna片段(高盐、低ph值),蛋白及其它杂质不被吸附而被除去,被吸附的dna片段在低盐、高ph值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度dna片段,此dna片段可直接用于各种酶促反应等。

 

质量控制

1 % tae琼脂糖凝胶中纯化50 bp1,000 bp10,000 bpdna片段。

 

保存条件

室温保存2年。

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

溶液pe第一次使用前请按瓶上标签加入4倍体积的无水乙醇,即15 ml溶液pe中加入60 ml无水乙醇,20 ml溶液pe中加入80 ml无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

本产品对电泳使用的琼脂糖种类没有严格限制。为了保证回收dna的质量和回收效率,尽量使用高纯度的琼脂糖。

电泳时请使用新鲜配制的tae电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。tbe电泳缓冲液中的硼酸与琼脂糖相互作用生成的复合物会影响dna的回收效率,因此tbe凝胶电泳不适合用于dna回收。

请适当延长电泳时间,在条带分离清晰后进行切胶回收,以免回收到多余杂带。

为提高dna回收收率,切胶时应尽量除去多余的胶块。

本试剂盒纯化柱的dna吸附能力强。但如果dna浓度小,或dna初始量少,回收率将会偏低。

溶液eluent10 mm tris-hcl, ph 8.5)中不含edta,其收集的dna片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

为了保证回收效率,请不要使用未调整ph值的超纯水洗脱目的片段。

请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

切取含有目的dna片段的琼脂糖凝胶条带。

尽量切除不含有目的dna部分的凝胶,减少凝胶体积,提高dna回收率。

    切胶时,请使用长波长uv360 nm)光盒。且不要将dna长时间暴露在紫外灯下,以防dna损伤。

称取凝胶的重量,近似地确定其体积。

    凝胶重量的称量方法:取1.5 ml2 ml离心管,用电子天平称初质量,切胶装在离心管后称终质量,两者差即为胶的质量。不同离心管的重量有差异,因此,每个离心管的重量需单独称量。

按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 µl溶液bd的比例,向离心管中加入溶液bd

4  50℃水浴7-10min,直至凝胶完全融化。期间需要振荡混合3次。

    琼脂糖必须完全融化,以免堵塞柱子,严重影响dna片段的回收效率。

    如果总体积大于500 µl,可适当增加溶胶时间。

若此时溶液变红,可加10 µl 3m naacph 5.2)。

如要从反应液中回收dna,则向反应液中加入等体积的bd,充分混匀,后续步骤相同:

将步骤4所获溶液置于dna纯化柱中,静置2min

胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合dna的能力较弱。

若溶液体积大于dna纯化柱的容积(700 µl),可分两次离心。

6  12,000 rpm离心1min,弃滤液。

此时dna片段被吸附于dna纯化柱中的硅胶膜上。

7  加入500 µl溶液bd12,000 rpm, 离心1min,弃滤液

8  加入500 µl溶液pe12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

    溶液pe初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

    此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量的dna片段。

加入500 µl溶液pe12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

10  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

    此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续酶促反应。同时也利于dna片段的充分溶解。

11  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl溶液eluent60℃预热),静置2min

12,000 rpm 离心1min,管底即为目的dna片段。贮存于-20℃

   溶液eluent可用无菌双蒸水代替,但其ph需为8.0-8.5,加入体积视dna目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

   对溶液eluent 65℃预热,会提高提取dna目的片段的产量。


姓名
电话号码
电子邮箱
公司名称
地址
留言*
 
验证码
提交