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酵母基因组dna快速提取试剂盒(n1161-n1162)

促销: 722.00~1287.00

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n1161(50次) n1162(100次)

酵母基因组dna快速提取试剂盒

 产品组分

货号

n1161

50次)

n1162

100次)

消化缓冲液ds

15 ml

30 ml

裂解液ms

20 ml

40 ml

蛋白酶k

1 ml

2 ml

去蛋白液ps

30 ml

60 ml

漂洗液pe

15 ml

30 ml

纯化液te

5 ml

10 ml

dna纯化柱

 50

 100

说明书

1

1

 

裂解液ms中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

漂洗液pe初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

●本试剂盒需单独购买试剂:溶壁酶(n9031/n9032)。

产品说明

本产品用于酵母基因组dna的小量提取。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组dna,由硅胶膜柱可逆吸附基因组dna,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组dna。本产品可从1-5×107的酵母细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组dnaod260/280 = 1.7-1.9)。

 

质量控制

提取的酵母基因组dna质量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。

 

保存条件

蛋白酶k室温运输,于-20℃保存,避免反复冻融。

其余试剂置于室温(15-25)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液dsms中有沉淀,可在55加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组dna的纯化效率。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

溶壁酶(n9031/n9032)需要客户另行购买。

蛋白酶k请单独保存,不要与裂解液ms混合,如果可能,请在加入蛋白酶k混匀后,稍稍静置再加裂解液ms,可以得到更好的裂解效果。

应尽量使用新鲜的菌体,确保提取的基因组dna不被降解。

在操作步骤4中,菌体应充分悬浮,不要残留菌块,避免影响溶菌效果。

在操作步骤5中,加入无水乙醇后,可能会出现絮状沉淀,应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中,确保基因组dna的得率。

所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm(约13,400×g)。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

向每只1.5 ml离心管中加入酵母细胞液1-5 ml(最多不超过5×107个细胞),12,000 rpm离心1min,尽量去除上清。

   菌液较多时,可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。

向菌体加入600 µl溶壁酶反应缓冲液,200 u溶壁酶,涡旋振匀,30℃消化30min

    可根据收集菌体量的不同、菌种的差异,溶壁酶比活的不同,相应调整溶壁酶的用量及消化时间。

3  5,000 rpm离心8-10min,去上清,收集沉淀。向收集到的菌体沉淀中加入200 μl消化缓冲液ds,振荡混匀。

   如需要去除rna,可加入4 μl rnase a100 mg/mln9042)溶液,振荡混匀,室温放置5min

加入20 μl蛋白酶k溶液,55℃水浴或金属浴30min

加入220 μl裂解液ms,涡旋振荡混匀,直至形成均一的悬浮液,65温浴10min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠,室温放置5min使溶液冷却。

   加入裂解液ms时可能会产生白色沉淀,一般65放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明酵母细胞裂解不彻底,可能导致提取dna量少和提取出的dna 不纯。    

   如菌体超过1.5 ml,可适当延长温浴时间。

加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀,此时可能出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   若溶液体积大于纯化柱容积(700 μl),可分两次离心。

此时基因组dna被吸附于dna纯化柱中的硅胶膜上。

如柱子堵塞表明菌体过量。若发生此情况,减少菌量,或适当延长离心时间,直至洗脱液顺利离心至离心管为止。

加入500 μl去蛋白液ps12,000 rpm离心1min,弃滤液。

  此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组dna

8  加入500μl漂洗液pe12,000 rpm离心1min,弃滤液。

  漂洗液pe初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

加入500 μl漂洗液pe12,000 rpm离心1min,弃滤液。12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

    此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(pcr或酶切)。同时利于基因组dna充分溶解。

10  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中,向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl洗脱液te,室温放置2min

11  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组dna-20保存。

    洗脱液te可用去离子水代替,但其ph需为8.0-8.5

对洗脱液te 65预热,会提高基因组dna的产量。


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